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发布时间：2021-10-20 06:23:34

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羊棘球蚴（包虫）病ELISA抗体检测试剂盒

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羊棘球蚴（包虫）病ELISA抗体检测试剂盒

羊棘球蚴(包虫)ELISA抗体检测试剂盒??IndirectELISAKitForEchinococcusGranulosus??使用说明书【简介】　　试剂盒由抗原包被板、血清稀释板、酶标二抗及其它试剂制成，应用间接ELISA法检测羊血清中抗羊棘球蚴(包虫)主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体。【用途】　　适用于养殖场及检验机构对羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗免疫效果的评价。【原理】　　本试剂盒是采用棘球蚴主要保护性抗原EG95包被微孔板。在试验中，若待测血清样品中含有抗棘球蚴的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合形成抗原—抗体复合物。之后加入的酶标二抗将与检测板上的抗原—抗体复合物发生特异性结合，再加入TMB底物溶液后形成蓝色产物。显色反应经终止液终止后呈黄色，最终通过测定450nm波长下吸光度即可得到结果。【试剂盒主要成分】?1?抗原包被板??????????????????2块????????????????????????????96孔/块2?阴性对照血清???1管????????????????????????????50μl?/管3?阳性对照血清????1管????????????????????????????50μl?/管4?酶标二抗???2管???????????????????????????0.2ml/管5?25倍浓缩洗涤液?????1瓶????????????????????????????25ml/瓶6?底物溶液A??????????1瓶????????????????????????????10ml/瓶7?底物溶液B?????????1瓶????????????????????????????10ml/瓶8?终止液????????????1瓶????????????????????????????10ml/瓶9?样品稀释液????2瓶????????????????????????????30ml/瓶10血清稀释板??????2块????????????????????????????96孔/块11说明书???????????????1张?【样品制备】　　取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。【试剂配制】　　使用前，试剂盒内除酶标二抗外的各种试剂都应恢复到室温（25?C左右）。25倍浓缩的洗涤液恢复至室温或略微加热后摇动使沉淀的盐溶解，然后用去离子水作25倍稀释，稀释好的洗涤液在2～8?C可以存放7天。酶标二抗在使用前用样品稀释液按1:100倍稀释，现配现用。【样品稀释】　　标准样品与待检样品均在血清稀释板中按1:50倍的体积稀释（推荐稀释方法：245μL样品稀释液中加5待检血清样品）。【操作步骤】?1、取抗原包被板，先加入50μL样品稀释液，再将稀释好的待检样品和对照样品各取50μL加入到抗原包被板孔中，用移液器轻轻吹打混匀。阴性对照和阳性对照各设2孔，置37?C温育30分钟。2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。3、每孔加入稀释好的酶标二抗100μL，置37?C温育30分钟。4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。5、每孔加入等体积混合好的底物溶液A与底物溶液B100μL，避光显色10分钟。6、每孔加终止液50μL，10分钟内测定450nm波长吸光度。【结果判定】?　　参考农业部关于印发《2013年国家动物疫病强制免疫计划》的通知，被检抗体正向间接血凝实验抗体效价≥25为阳性。根据该通知制定结果判定标准：?1实验结果同时满足下列条件，方为有效：标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。2疫苗免疫后抗体水平检测结果的判定：样品OD450nm≤0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阴性。样品OD450nm＞0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阳性。样品OD450nm处于0.3±0.02临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。3对细粒棘球蚴(包虫)免疫保护力检测结果的判定：样品OD450nm≤0.3，判为无保护力，所检样品对细粒棘球蚴(包虫)感染无保护力。样品OD450nm介于0.3与0.6之间，判为保护力低下，抗体水平较低，对细粒棘球蚴(包虫)感染有一定保护力。样品OD450nm≥0.6，判为有保护力，所检样品抗体水平较高，在攻毒试验中可提供高于90%的抵抗力。样品OD450nm处于0.3±0.02或者0.6±0.02两个临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。?【注意事项】1?本底过高可导致结果整体水平偏高，实验过程需保证二抗清洗干净，或实验中添加空白对照。2?环境温度低于15?C可导致结果整体水平偏低，实验过程需保证环境温度尽量接近25?C，或适当延长底物液显色时间。3?底物液A和底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。?4?浓缩洗涤液用去离子水稀释，如果发现有结晶，应水浴加热使其溶解。5?酶标二抗应现配现用。6?4?C过夜孵育样品及酶标二抗可以获得更好的结果。?【贮?存】?2～8?C避光保存?【有效期】?9个月【生产企业】?重庆澳龙生物制品有限公司【地?址】?重庆市荣昌县昌元镇昌州大道东段板桥四支路3-03????【邮?编】?402460【技术服务】?023-85261707?????????【销售热线】?023-85261703（传真）

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参数

羊棘球蚴(包虫)ELISA抗体检测试剂盒 Indirect ELISA Kit For Echinococcus Granulosus

使用说明书

【简介】

　　试剂盒由抗原包被板、血清稀释板、酶标二抗及其它试剂制成，应用间接ELISA法检测羊血清中抗羊棘球蚴(包虫)主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体。

【用途】

　　适用于养殖场及检验机构对羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗免疫效果的评价。

【原理】

　　本试剂盒是采用棘球蚴主要保护性抗原EG95包被微孔板。在试验中，若待测血清样品中含有抗棘球蚴的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合形成抗原—抗体复合物。之后加入的酶标二抗将与检测板上的抗原—抗体复合物发生特异性结合，再加入TMB底物溶液后形成蓝色产物。显色反应经终止液终止后呈黄色，最终通过测定450nm波长下吸光度即可得到结果。

【试剂盒主要成分】

1 抗原包被板	2块 96孔/块
2 阴性对照血清	1管 50μl /管
3 阳性对照血清	1管 50μl /管
4 酶标二抗	2管 0.2ml/管
5 25倍浓缩洗涤液	1瓶 25ml/瓶
6 底物溶液A	1瓶 10ml/瓶
7 底物溶液B	1瓶 10ml/瓶
8 终止液	1瓶 10ml/瓶
9 样品稀释液	2瓶 30ml/瓶
10血清稀释板	2块 96孔/块
11说明书	1张

【样品制备】

　　取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

【试剂配制】

　　使用前，试剂盒内除酶标二抗外的各种试剂都应恢复到室温（25?C左右）。25倍浓缩的洗涤液恢复至室温或略微加热后摇动使沉淀的盐溶解，然后用去离子水作25倍稀释，稀释好的洗涤液在2～8?C可以存放7天。酶标二抗在使用前用样品稀释液按1:100倍稀释，现配现用。

【样品稀释】

　　标准样品与待检样品均在血清稀释板中按1:50倍的体积稀释（推荐稀释方法：245μL样品稀释液中加5

待检血清样品）。

【操作步骤】

1、取抗原包被板，先加入50μL样品稀释液，再将稀释好的待检样品和对照样品各取50μL加入到抗原包被板孔中，用移液器轻轻吹打混匀。阴性对照和阳性对照各设2孔，置37?C温育30分钟。

2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。

3、每孔加入稀释好的酶标二抗100μL，置37?C温育30分钟。

4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。

5、每孔加入等体积混合好的底物溶液A 与底物溶液B 100μL ，避光显色10分钟。

6、每孔加终止液50μL，10分钟内测定450nm波长吸光度。

【结果判定】

　　参考农业部关于印发《2013年国家动物疫病强制免疫计划》的通知，被检抗体正向间接血凝实验抗体效价≥25为阳性。根据该通知制定结果判定标准：

1 实验结果同时满足下列条件，方为有效：

标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。

标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。

2 疫苗免疫后抗体水平检测结果的判定：

样品OD450nm≤0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阴性。

样品OD450nm＞0.3，判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阳性。

样品OD450nm处于0.3±0.02临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。

3 对细粒棘球蚴(包虫)免疫保护力检测结果的判定：

样品OD450nm≤0.3，判为无保护力，所检样品对细粒棘球蚴(包虫)感染无保护力。

样品OD450nm介于0.3与0.6之间，判为保护力低下，抗体水平较低，对细粒棘球蚴(包虫)感染有一定保护力。

样品OD450nm≥0.6，判为有保护力，所检样品抗体水平较高，在攻毒试验中可提供高于90%的抵抗力。

样品OD450nm处于0.3±0.02或者0.6±0.02两个临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。

【注意事项】

1 本底过高可导致结果整体水平偏高，实验过程需保证二抗清洗干净，或实验中添加空白对照。

2 环境温度低于15?C可导致结果整体水平偏低，实验过程需保证环境温度尽量接近25?C，或适当延长底物液显色时间。

3 底物液A和底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。

4 浓缩洗涤液用去离子水稀释，如果发现有结晶，应水浴加热使其溶解。

5 酶标二抗应现配现用。

6 4?C过夜孵育样品及酶标二抗可以获得更好的结果。

【贮存】 2～8?C避光保存

【有效期】 9个月

【生产企业】 重庆澳龙生物制品有限公司

【地址】 重庆市荣昌县昌元镇昌州大道东段板桥四支路3-03

【邮编】 402460

【技术服务】 023-85261707

【销售热线】 023-85261703（传真）

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